[WOC2014]视网膜神经细胞的替身演员
2014-04-03 国际眼科时讯
WOC会上，中山大学中山眼科中心的葛坚教授于4月3日上午进行了题为“视网膜神经性诱导的人Tenon’s源性iPS细胞”的口头报告。通过异位表达Oct-3/4、Sox2、c-Myc和klf4，体细胞的直接重组可变为多能状态，SOX-2作为重组的关键因子，在视网膜的形成过程中具有重要作用。该报告旨在明确是否源于人Tenon’s囊成纤维细胞（HTFs）的诱导的多能干细胞（iPSCs）能够表达视网膜前体细胞（RPC）相关基因，并具有在体外直接分化为视网膜神经元的能力。
该研究所用HTF来自中山眼科中心眼库，斜视或青光眼滤过手术中匿名捐赠的组织，捐赠者年龄18~60岁。从新鲜样本取材的HTFs通过逆转录病毒转导为iPSCs，利用形态学、基因表达、表面抗原、碱性磷酸酶活性分析和畸胎瘤形成分析等对HTF源性iPSCs（TiPSCs）进行了特性检测。人ESC集落作为阳性对照，获得的TiPSCs逐步加入下列因子进行向视网膜细胞的诱导分化：Dkk1、Noggin、Lefty-A、DAPT和过表达的ATOH7，这符合人视网膜形成的时间线。对诱导得到的视网膜细胞进行相差显微镜、实时PCR、免疫荧光、FACS分析和钙显像分析等检测。
根据统一标准，实验获得的TiPS集落与人ESC集落无区别。在无血清悬浮培养中TiPSCs形成的拟胚体（EBs）的RPC相关基因表达增加，如Pax6HE Sox2，在基质胶培养中第10天获得神经上皮集落。TiPSC能生成表达Chx10、Brn3b、Atoh7、Syn、Crx、Mitf和GFAP等的视网膜神经细胞。
上述研究发现表明，HTFs能够生成iPSCs，并且通过逐步的神经性分化策略，TiPSCs能离体生成视网膜特异性细胞，这一发现有助于眼科再生医学的探索。 |
